Spodoptera frugiperda, to jeden z najważniejszych szkodników kukurydzy, który niedawno zaatakował Chiny. W celu określenia wpływu zwalczania wirusa wielonukleotydowego Autographa californica (AcMNPV) na larwy S.frugiperda, zbadano i przeanalizowano działanie owadobójcze i wpływ biokontroli AcMNPV na S.frugiperda za pomocą metod biotestu i polowego testu skuteczności.Wyniki wykazało, że średnie stężenie śmiertelne (LC50)AcMNPV działającego na 2IIlarwy w stadium larwalnym S.Frugiperda wynosiły 2,9x107PIB/ml.Średnia skuteczność kontrolna 107Zawiesina PIB/ml AcMNPV+Bt (1500 ml/hm2) na S.frugiperda wynosił 68,99% na 10tdnia i 66,87% w dniu 15tNa koniec, do identyfikacji homologii DNA martwych owadów użyto oprogramowania DNAMAN 6.0, a wyniki wykazały, że sekwencje genów polh, lef-8 i lef-9 martwego owada i S．Frugiperda były w 100% identyczne. Wszystkie powyższe wyniki mogą dodatkowo zweryfikować, że AcMNPV może odgrywać kluczową rolę w kontrolowaniu S．Frugiperda. Sugeruje się, że 107PIB/ml AcMNPV+Btzawiesina (1500ml/hm2)należy stosować w szczytowym okresie występowania młodych larw S.frugiperda oraz po 16:00-17:00 w słoneczny dzień, aby uniknąć wpływu wysokiej temperatury i światła, aby preparat wirusa mógł odegrać lepszą rolę i poprawić swoje działanie zwalczające S.frugiperda.
AcMNPV; Spodoptera frugiperda; Lepidopterapester; larwalny; biopestycydy;AcMNPV+Bt zawieszenie; działanie owadobójcze; zapobieganie i kontrola ekologiczna
Spodoptera frugiperda to wszystkożerny szkodnik wędrowny, który po raz pierwszy przybył do Chin z Birmy w 2019 r. i szybko rozprzestrzenił się w 1518 okręgach w 26 prowincjach i gminach Chin, stwarzając poważne zagrożenie dla bezpieczeństwa żywnościowego Chin. Do chwili obecnej strategia zwalczania Armyworm ograniczanie epidemii Armyworm nadal opiera się na intensywnym stosowaniu chemicznych pestycydów. Nadużywanie chemicznych pestycydów może łatwo spowodować uodpornienie szkodników, ponowne szerzenie się pozostałości i zanieczyszczeń środowiska. Szereg poważnych problemów poważnie ograniczył zrównoważony rozwój współczesnego rolnictwa. Stąd konieczność stosowania biologicznych metod zwalczania lub substytucji biopestycydów. Stosowanie pestycydów do zwalczania Armyworm staje się coraz ważniejsze i cieszy się coraz większym zainteresowaniem.
Wirus wielonukleopoliedryczny Autographa californica AcMNPV to wieloziarnisty wirus poliedrozy jądrowej wyizolowany z larwy Argyria alfalfa. Może infekować krzyżowo ponad 30 rodzajów szkodników z rzędu Lepidoptera, takich jak ćma buraczana, ćma kapuściana, Argyria argyra i Calyptera teristoides. Typ mieszany z Bt i innymi insektycydami oraz wirusami szkodników niebędących przedmiotem zwalczania jako synergetykami wyraźny efekt synergiczny na wiele szkodników Noctuidae, a dodatkowo poszerza spektrum owadobójcze i poprawia działanie owadobójcze. AcMNPV to nowy biopestycyd wirusa owadów opracowany przez Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD. Jest to połączenie wirusa poliedrozy jądrowej Argyria alfalfa i silnego synergetyka wirusa Bt. Dzięki dobrej aktywności owadobójczej A jest szeroko stosowany w warzywach, drzewach owocowych, ryżu i innych polach. W tym artykule wykryto i oceniono działanie owadobójcze i działanie biokontroli wirusa wielonukleopoliedrycznego Autographa californica (AcMNPV) przeciwko Spodoptera frugiperda za pomocą laboratoryjnego testu aktywności i eksperymentu polowego, w celu zapewnienia danych potwierdzających szerokie zastosowanie wirusa poliedrozy jądrowej w biologicznej kontroli Spodoptera frugiperda w kukurydzy. Dostarcza podstaw teoretycznych do rejestracji i zastosowania środka zawieszającego AcMNPV plus Bt w zwalczaniu Armyworm.
Badanym wirusem był wirus wielonukleopoliedryczny Autographa californica (AcMNPV). W dniu 20 maja 2019 r. z pola kukurydzy w mieście Xiantao w prowincji Hubei pobrano Spodoptera frugiperda, a test przesiewowy w kierunku zakażenia wirusem przeprowadzono w laboratorium Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD. (W którym Autographa Californica wielonukleopoliedryczny wirus AcMNPV ma wysoką aktywność zakaźną przeciwko Spodoptera frugiperda). Larwy Spodoptera frugiperda hodowano w celu wzrostu i rozmnażania. Martwe larwy zakażone wirusem zmielono z wodą, przesączono przez 3 warstwy gazy, a filtrat odwirowano przy 600 obr./min i 300 obr./min. 1,8*1010zjadliwe wielościany na ml (Polyhedralinclusionbody PIB), to znaczy, aby uzyskać czysty techniczny wirus poliedrozy (1,8 x 1010PIB/mL), zakonserwować w niskiej temperaturze i odstawić.
Badanym czynnikiem biologicznym była poliedroza jądrowa Autographa california.Bacillus thuringiensis w skrócie AcNPV.Bt (1,0 *107 PIB/ml). Został opracowany przez firmę Wuhan Unioasis Biological Technology Co., LTD i wyprodukowany przez jej spółkę zależną Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD.
Eksperymentalnym owadem była Spodoptera frugiperda. W dniu 20 lipca 2019 r. z letniego pola kukurydzy w wiosce Banqiao w mieście Dachangzhen w hrabstwie Tongshan w prowincji Hubei zebrano larwy Spodoptera frugiperda i przywieziono z powrotem do laboratorium Instytutu Badań nad Glebą i Nawozami Ochrony Roślin Akademii Nauk Rolniczych w Hubei. Świeże i delikatne liście kukurydzy karmiono pojedynczo w jednorazowych plastikowych szalkach Petriego (średnica 8 cm, wysokość 3 cm). Warunki karmienia w pomieszczeniach zamkniętych wynosiły: :(25±1) ℃ i wilgotność względna 60% -70%, fotoperiod wynosi 16L:8D. Po wielu pokoleniach reprodukcji świeże i sterylizowane bloki jaj pozostają do użytku.
Sześć gradientów stężeń, 1,0 *109, 1,0*108, 1,0*107, 1,0*106, 1,0*105, 1,0*104zostały zaprojektowane w tym eksperymencie. Najpierw rozcieńczono TC AcNPV do 1,0*109PIB/ml, a następnie rozcieńczono 10 razy w celu uzyskania innych rozcieńczalników o różnych stężeniach. Do doświadczenia traktowano ślepą próbę kontrolną. W sumie przeprowadzono 7 procesów, przy czym każdy proces powtarzano 3 razy.
Przyjęto metodę żywienia segmentami liści, to znaczy świeże młode liście kukurydzy (długość 2 cm * szerokość 2 cm) najpierw traktowano sprayem zawiesinowym wirusa, następnie karmiono larwami, a pojedynczą główkę karmiono na szalkach Petriego. Paski żywieniowe miały: temperaturę (25±1)℃, fazę do wilgotności (60% ~ 70%), fotoperiod (16L:8D). Po zjedzeniu toksycznych liści kukurydzy należy natychmiast dodać świeże, nietoksyczne liście kukurydzy. 48 larwy Armyworm w drugim stadium rozwojowym poddano zabiegowi wielokrotnie. Część referencyjna 9{9-11}, Biorąc pod uwagę zmiany proliferacji wirusa w komórkach i żywicielach rodziny ćmy, zbadano liczbę martwych owadów z powodu wirusa i całkowitą liczbę martwych owadów w 7 i 10 dniu po zakażeniu, obliczono współczynnik śmiertelności i obliczono LC50.
Test skuteczności polowej przeprowadzono na polu kukurydzy letniej we wsi Xiaoyuan w mieście Chuangwang w hrabstwie Tongshan w prowincji Hubei. Powierzchnia testowa ma w sumie 1500m２, rodzaj gleby to wapienna, wartość pH wynosi 6,8, zawartość materii organicznej 13,9%, a żyzność średnia do wysokiej. Kukurydza jest sadzona przez cały rok, odmiana kukurydzy to Xiyu nr 3. 13 lipca 2020 r. zastosowano 45% nawozu wieloskładnikowego 750kg//hm２zostanie zastosowany jako nawóz podstawowy i wysiany. Od 2019 roku na tym polu obserwuje się poważne występowanie Armyworma jesiennego.
Łącznie 10 milionów zawiesin AcMNPV.BT (1500 ml/hm2) i 15% benzoesanu emamektyny. Zawiesina indokarbu (300 ml/ hm2), powszechnie stosowany środek owadobójczy i ślepą kontrolę, poddano 3 zabiegom. Każdy zabieg powtórzono 4 razy, w sumie 12 poletek doświadczalnych, każde o powierzchni 100 m2
Po południu 26 sierpnia 2020 r. (kiedy często występują larwy Spodoptera frugiperda) należy raz wieczorem spryskać pestycydem. Stosowany jest wielofunkcyjny elektryczny spray plecakowy marki Lebang 3WBJ-16DZ, o ciśnieniu roboczym 0,40 ~ 0,60 MPa, średnicy otworu 1 mm i natężeniu przepływu 60 ~ 85 l/h. Dzień stosowania pestycydów jest słoneczny, temperatura wynosi 23-32℃. Przeprowadź ankiety 1., 3., 5., 7., 10. i 15. dnia po aplikacji. W trakcie badań z każdego poletka pobrano 10 losowych punktów poboru próbek, a w każdym punkcie badano w sposób ciągły 10 roślin, co dało łącznie 100 roślin. Rejestrowano liczbę żywych owadów, zgonów, zatruć i naturalnych wrogów na każdej roślinie kukurydzy. Odpowiedni wzór obliczeniowy jest następujący;
Wskaźnik spadku owadów = (liczba żywych owadów przed zastosowaniem - liczba żywych owadów po zastosowaniu)/liczba żywych owadów przed zastosowaniem
Efekt zapobiegania i zwalczania=(Spadek liczby owadów na obszarze poddawanym zabiegowi – Zmniejszenie liczby owadów na obszarze kontrolnym)/(100 – Zmniejszenie liczby owadów na obszarze kontrolnym)*100%
1) Przetestuj próbki wirusa. Wybrać ług macierzysty ACMNPV do określenia aktywności w pomieszczeniach zamkniętych (próbka 1), preparat biologiczny 10 milionów ACMNPV.Bt SC (próbka 2), zwłoki owadów zakażone wirusem po badaniu skuteczności w terenie (próbka 3) oraz larwy Armyworm drugiej generacji zakażone zwłokami owadów zebrane w próbce 3 (próbka 4) jako próbki wirusa testowego, aby sprawdzić, czy AcMNPV w 10 milionach ACMNPV.Bt ma działanie bakteriobójcze przeciwko larwom larw armii jesiennej.
2) Ekstrakcja DNA. Pobrać 1,0 ml próbki AcMNPV, dodać 99,0 ml wody destylowanej i dokładnie oscylować przez 1 minutę. Po oscylacji pobrać 300 µl zawiesiny, dodać 100 µl alkalicznego roztworu krakującego, łaźnię wodną o temperaturze 37 ℃ przez 30 minut. Dodać 200 µl buforu Tris·HCl i wirować przy 10000 obr/min przez 8 minut. Pobrać supernatant do probówki wirówkowej, dodać 5 µl Proteazy K i 60 µL SDS, łaźnię wodną w temperaturze 65 ℃ przez 2 godziny, usunąć i ochłodzić do temperatury pokojowej. Dodać 650 µl dołka nasyconego fenolu Mix L Tris, wirować przy 10000 obr./min przez 5 minut i przenieść supernatant do nowej probówki wirówkowej. Dodać 650 µl mieszaniny fenolu i chloroformu (stosunek objętościowy 1:1), wirować przy 10000 obr./min przez 5 minut, a następnie przenieść supernatant do nowej probówki wirówkowej. Dodać 650 µl mieszaniny chloroformu i alkoholu izoamylowego (stosunek objętościowy 24:1), wirować przy 10000 obr./min przez 5 minut, a na koniec przenieść supernatant do nowej probówki wirówkowej. Zmierzyć stężenie DNA za pomocą spektrofotometru.
3) Amplifikacja PCR. Używając standardowego systemu supermix T3: Próbka DNA 2 μl. 0,5μl starterów przed i po, supermiks T3 18μl i ddH₂O7μl. Warunki amplifikacji PCR wynoszą 95 ℃. Po 3 minutach wstępnej denaturacji przeprowadza się następujące cykle: 98 ℃ przez 15 sekund, 52 ℃ przez 20 sekund, 72 ℃ przez 20 sekund i na koniec 72 ℃ przez 5 minut, w sumie 42 razy cykl.
4) Elektroforeza DNA w żelu agarozowym. Wziąć 2 µl produktu amplifikacji PCR i marker DNA o wielkości 5 kb, umieścić w żelu agarozowym i poddać elektroforezie przy 180 V przez 20 min. Po elektroforezie obserwować produkty PCR w systemie obrazowania żelu.
Podkład Polh powyżej:
AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT
Podkład Polh poniżej:
GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTGTG-CAAACTCCTT
Podkład górny Lef-8:
AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC
Startery Lef-8 poniżej:
GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATTCTTTCGGC
Startery Lef-9 powyżej
AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGG
Startery Lef-9 poniżej:
GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC
Na koniec zastosuj oprogramowanie DNAMAN6.0, aby porównać zmierzone sekwencje polh, lef-8 i lef-9.
Dane eksperymentalne przetwarzano przy użyciu oprogramowania do analizy statystycznej danych IBM SPSS 22.0.
W eksperymencie określającym aktywność owadobójczą wirusa zlicza się liczbę martwych i żywych owadów traktowanych każdym stężeniem, oblicza się współczynnik śmiertelności i skorygowany procent martwych zwierząt i przekształca je w wartości prawdopodobieństwa. Stężenie każdego zabiegu przelicza się na wartości lg. Równanie regresji zjadliwości (nachylenie ± SE) oblicza się na podstawie roboczych wartości prawdopodobieństwa i wag oraz LC50Wartość i jej granica ufności 95%, a na koniec wykonaj test chi-kwadrat (2). W doświadczeniu polowym kontroli efektu policzono liczbę żywych owadów w każdym zabiegu i obliczono stopień redukcji szkodników. Efekt kontroli obliczono za pomocą formuły edycyjnej programu Microsoft Excel. Do analizy wykorzystano metodę Duncana, a do porównania istotnych różnic pomiędzy terapiami zastosowano jednoczynnikową ANOVA,
Wszystkie wykresy zawarte w tekście zostały utworzone przy użyciu oprogramowania Microsoft Excel.
Wyniki testów aktywności w pomieszczeniach zamkniętych (Tabela 1) pokazują, że po 7 dniach leczenia LC50AcMNPV działa na larwy w drugim stadium rozwojowym Spodoptera frugiperda wynosi 4,1x107PIB/ml i LC90wynosi 1,05 x 108PIB/ml. Po 10 dniach leczenia LC50AcMNPV działającego na larwy w drugim stadium wynosi 2,9x107PIB/ml i LC90wynosi 7,8 x 107PIB/ml. LC50i Ł.C90Działanie AcMNPV na larwy w drugim stadium larw armii jesiennej po 7 dniach leczenia było wyższe niż po 10 dniach, co wskazuje, że AcMNPV wykazywał dobre działanie owadobójcze przeciwko larwom Spodoptera frugiperda po 7 dniach.
Wyniki terenowych badań skuteczności wykazały, że 10 milionów AcMNPV. Bt SC (1500 ml/hm2) miał stosunkowo powolny wpływ na larwy spodoptera frugiperda. Średni efekt zwalczania w 1., 3. i 5. dniu po oprysku wyniósł odpowiednio 11,57%, 16,23% i 15,56%. Średni efekt zwalczania w 7. dniu po oprysku wyniósł jedynie 21,88%. Natomiast 10 dnia po oprysku skuteczność zwalczania owadów nagle wzrosła do 68,99%, a średni efekt zwalczania 15 dnia po oprysku również wyniósł 66,87%. Jednak w porównaniu do środków chemicznych Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% (300mL/hm2), miał dobre działanie zabójcze na larwy spodoptera frugiperda, co może szybko zmniejszyć liczebność populacji owadów. Średni efekt kontroli w 1., 3., 5. i 7. dniu po podaniu leku wyniósł odpowiednio 91,39%, 92,66%, 90,71% i 87,19%. Jednakże średni efekt kontroli w 10. dniu zaczął się zmniejszać, już tylko do 67,63%, a średni efekt kontroli w 15. dniu spadł do 51,60%. Szczegółowe informacje można znaleźć w tabeli 2.
Jednocześnie odkryliśmy również, że tempo spadku liczby owadów na obszarze kontrolnym było ujemne w 1., 3. i 5. dniu po zabiegu, co wskazuje na wzrost liczby owadów. Siódmego dnia po zabiegu wynik zaczął być dodatni (populacja owadów zaczęła się zmniejszać). Średnie tempo spadku liczebności owadów w 10 i 15 dniu wyniosło odpowiednio 38,25% i 47,00%, co jest wysoce prawdopodobne, ponieważ część larw spodoptera frugiperda zaczęła się przepoczwarzać w glebie, a pokolenia zachodziły na siebie po 10-15 dniach.
Podsumowując, można zauważyć, że 10 milionów AcMNPV. Bt SC (1500 ml/hm2) ma pewien wpływ na zwalczanie spodoptera frugiperda, ale jego działanie jest powolne, a skuteczność wynosi około 10-15 dni po zastosowaniu.
Podczas eksperymentów terenowych efekty 10 milionów AcMNPV. Badano również zawiesinę Bt na naturalnych wrogach szkodników kukurydzy, takich jak pająki, biedronki i chrząszcze. Wyniki wykazały, że 10 milionów AcMNPV. Zawiesina Bt nie wyrządziła znaczących szkód naturalnym wrogom, takim jak pająki, biedronki i chrząszcze, przy średniej liczbie 13,4 naturalnych wrogów na 100 roślin. Jednakże środki chemiczne Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% zawiesina miały znaczący toksyczny wpływ na naturalnych wrogów, takich jak pająki, biedronki i chrząszcze. Pierwszego dnia po zabiegu na 100 roślinach kukurydzy średnia liczba naturalnych wrogów wynosiła zaledwie 3,1, a trzeciego dnia po zabiegu stwierdzono już tylko 5,2 naturalnych wrogów różnego typu (ryc. 1). Można zauważyć, że 10 milionów AcMNPV. Zawiesina Bt dobrze działa ochronnie na naturalnych wrogów szkodników, natomiast zawiesina Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% powoduje stosunkowo większe szkody u naturalnych wrogów.
Wyniki amplifikacji PCR różnych próbek testowych wykazały, że fragmenty amplifikacji polh, lef-8 i lef-9 próbek 1, 2, 3 i 4 były spójne i miały prawidłową wielkość. Produkty PCR genów polh, lef-8 i lef-9 wynosiły odpowiednio 0,54, 0,716 i 0,29 kb (ryc. 2), co dowodzi, że AcMNPV ma działanie owadobójcze wobec larw spodoptera frugiperda.
Na koniec zastosowano oprogramowanie DNAMAN 6.0 do przeprowadzenia dopasowania sekwencji amplifikowanych fragmentów polh, lef-8 i le.f-9 w próbkach 1, 2, 3 i 4 (ryc. 3). Wyniki pokazały, że podobieństwo między amplifikowanymi sekwencjami polh, lef-8 i lef-9 w próbkach 1, 2, 3 i 4 wynosiło 100%, co wskazuje, że wszystkie próbki 1, 2, 3 i 4 pochodzą od tego samego wirusa AcMNPV.
AcMNPV to wirus w kształcie pałeczki owada, który zakaża organizm owadów poprzez żerowanie. Wirus namnaża się i rozprzestrzenia po całym ciele owada, stopniowo zakażając całe ciało i ostatecznie prowadząc do śmierci. Wyniki tego badania wskazują, że AcMNPV ma dobrą aktywność biologiczną przeciwko larwom Spodoptera frugiperda. Jego LC w 7. i 10. dniu wyniosło odpowiednio 4,1x107 i 2,9x107PIB/m i wykazał dobre efekty zwalczania w terenie. Mieszana zawiesina 10 milionów AcMNPV.Bt (1500 ml/hm2) wykazywały dobre średnie efekty zwalczania w 10. i 15. dniu po zabiegu, osiągając odpowiednio 68,99% i 66,87% i były bezpieczne dla naturalnych wrogów. Dlatego należy przyspieszyć tempo prac badawczo-rozwojowych, aby AcMNPV mógł odegrać większą rolę w biologicznej kontroli Spodoptera frugiperda. Zawiesina 10 milionów AcMNPV.Bt wyprodukowana przez Wuhan Chuqiang Biotechnology Co., Ltd. jest związkiem AcMNPV i biopestycydu Bacillus thuringiensis (Bt), który może znacząco poprawić aktywność owadobójczą wirusa. Ponieważ Bt jest insektycydem o szerokim spektrum działania i dobrym działaniu owadobójczym na drobnoustroje, połączenie AcMNPV z Bt powinno znacząco poprawić toksyczność w porównaniu z pojedynczym preparatem. To nie tylko rozszerza zakres owadobójczy Bt, ale także zwiększa jego toksyczność, osiągając cel, jakim jest zastosowanie jednego preparatu do zwalczania wielu szkodników. Jest to również powód, dla którego można szeroko promować zawieszenie 10 milionów AcMNPV.Bt w warzywach, drzewach owocowych i ryżu. W związku z tym można promować 10 milionów AcMNPV.Bt jako ekologiczny środek zwalczania Spodoptera frugiperda w kukurydzy
W tym badaniu, podczas prowadzenia polowych testów skuteczności, w przypadku gwałtownego spadku populacji owadów na obszarze kontrolnym (stopień spadku owadów w 15 dniu osiągnął 47,00%), średni efekt zwalczania 10 milionów zawiesiny AcMNPV.Bt (1500ml/hm)2) w 15. dobie po zabiegu wyniosła 66,87%, wykazując szybką tendencję wzrostową. Podczas gdy średni efekt zwalczania pestycydu chemicznego 15% metoksazol · indefenkarb SC (300 ml/hm2) w 15. dniu po zabiegu spadł do 51,60%. Chociaż można zauważyć, że zawiesina 10 milionów AcMNPV.Bt (1500 mL/hm2) ma pewien wpływ zwalczający Spodoptera frugiperda w dniach od 10 do 15, biorąc pod uwagę powolną skuteczność pestycydów biologicznych oraz krótką żywotność i nakładające się pokolenia larw Spodoptera frugiperda, zaleca się zwiększenie liczby badań i wydłużenie czasu badań podczas prowadzenia badań skuteczności polowej pestycydów biologicznych (zwłaszcza preparatów wirusowych), co może umożliwić osiągnięcie doskonalszych wyników eksperymentalnych. Jest to również ograniczenie tego badania. Podsumowując, w porównaniu ze środkami biologicznymi, środki chemiczne mają stosunkowo większą skuteczność zabijania szkodników i szybko działają. Można je stosować jako awaryjny środek zapobiegania i zwalczania szkodników. Kiedy szkody ze strony szkodników występują stosunkowo rzadko, pestycydy biologiczne mogą zastąpić pestycydy chemiczne jako jeden z zielonych środków zapobiegania i kontroli, zmniejszając w ten sposób zanieczyszczenie środowiska i osiągając efekt ochrony ekologii rolnictwa.
Ponadto gen Polh (poliedryna) zastosowany w tym badaniu jest rodzajem wielościennego promotora białka, on i P10 są najczęściej stosowanymi promotorami w systemie wektorów ekspresyjnych bakulowirusa (BEVS), z których oba ulegają silnej ekspresji w późnym stadium infekcji wirusowej[13]. Jednakże aktywność promotora p10 jest niższa niż promotora polh, dlatego promotor polh jest często stosowany do ekspresji białek egzogennych. Gen lef-8 może kodować największą podjednostkę własnej polimerazy RNA wirusa i jest rodzajem późnego czynnika ekspresji[14]. lef-9 jest rodzajem późnego czynnika ekspresji, który w bakulowirusach koduje podjednostkę kompleksu białkowego z lef-4, lef-8 i p47. Badania wykazały, że wirusy pozbawione genu lef-9 nie mogą wytwarzać cząstek wirusa o działaniu zakaźnym, podczas gdy wirusy posiadające gen lef-9 mogą przywrócić aktywność zakaźną wirusa poprzez jego przywrócenie. Dlatego gen lef-9 jest genem niezbędnym dla bakulowirusa tworzącego BV (wirusa pączkowego) o działaniu zakaźnym[15]. Można zauważyć, że geny lef-8 i lef-9 wykazują wysoki konserwatyzm w różnych typach wirusów poliedrozy jądrowej, zatem geny lef-8 i lef-9 można wykorzystać jako podstawę do identyfikacji typów wirusów. Dlatego w tym badaniu jako obiekty do wykrywania wykorzystano polh, lef-8 i lef-9, a dzięki dopasowaniu sekwencji genów homologia była wysoka, osiągając 100%. Metoda szybkiej detekcji molekularnej po raz kolejny potwierdziła, że AcMNPV ma dobre działanie owadobójcze przeciwko Spodoptera frugiperda, co nadaje się do dalszej promocji i zastosowania w zapobieganiu i zwalczaniu Spodoptera frugiperda.
Od 2019 roku Spodoptera frugiperda zaatakowała Chiny i stała się ważnym szkodnikiem kukurydzy. Utworzył osiadłą populację na niektórych obszarach południowych i południowo-zachodnich Chin, powodując ogromne straty dla chińskiego przemysłu kukurydzianego i poważnie zagrażając bezpieczeństwu żywnościowemu Chin[16]. W obliczu obecnej trudnej sytuacji w zakresie zapobiegania i kontroli Spodoptera frugiperda w Chinach należy pilnie przyspieszyć badania przesiewowe i opracowanie skutecznych pestycydów w celu zapobiegania i kontroli Spodoptera frugiperda[17]. Chociaż insektycydy wirusowe ograniczyły swoje szerokie zastosowanie ze względu na powolne działanie i wąskie spektrum owadobójcze, w kontekście rosnącej uwagi poświęcanej ekologii i ochronie środowiska, oczekuje się, że insektycydy bakulowirusowe będą coraz szerzej stosowane w produkcji rolnej ze względu na ich znaczną przewagę nad tradycyjnymi pestycydami. Ze względu na podatność preparatów wirusa owadów na warunki zewnętrzne, takie jak wysoka temperatura, światło słoneczne, deszcz, a także wiek szkodników [18]. Dlatego zaleca się stosowanie pestycydów w okresie szczytowego występowania larw szkodników. Najlepiej stosować go po godzinie 16:00-17:00 w słoneczne dni, aby uniknąć wpływu niekorzystnych warunków środowiskowych, takich jak wysoka temperatura i światło, aby preparat wirusa mógł lepiej spełniać swoją rolę i poprawiać skuteczność zwalczania szkodników.